Introducción: La Tiopurina metiltransferasa (TPMT) es una enzima importante en el metabolismo de la Azatioprina, fármaco empleado en el tratamiento de pacientes con cáncer, enfermedades autoinmunes y trasplantados. La disminución de la actividad de esta enzima, en pacientes tratados, puede provocar una serie de eventos adversos. La cuantificación de su actividad es una exigencia de la OMS para la dosificación individualizada del mismo. En Cuba  no  hay disponibilidad de un método analítico para este fin. Objetivo: Desarrollar un método analítico para cuantificar la actividad intraeritrocitaria de la enzima TPMT. Material y Métodos: Muestra biológica: sangre total con EDTA procedente de sujetos sanos y pacientes tratados. La actividad de TPMT se analizó incubando a 37ºC durante 1h la mezcla de 6mercaptopurina  y S-adenosil-l-metionina con 200 µL de hemolizado. Se empleó  HPLC en fase reversa, técnica isocrática y detección ultravioleta para la cuantificación del producto 6MetilMercaptopurina (6MMP). Los parámetros evaluados fueron: Especificidad, linealidad, exactitud y precisión. El nivel de actividad de TPMT fue calculado estimando el área bajo la curva del pico de 6MMP. Resultados: El tiempo de retención de la 6MMP fue de 4.5min. El método mostró ser específico evidenciándose la ausencia de la interferencia de compuestos presentes en la muestra biológica.  Se demostró linealidad en el rango de concentración de 6MMP utilizado, con coeficientes de correlación de 0.99. El porciento de  recobrado fue 99.2 y el coeficiente de variación entre ensayos fue 2.3 %,  por lo que el método fue considerado como exacto y preciso. Conclusiones: Se cuenta con un método para la determinación de la actividad de esta enzima.