Introducción: En Cuba los programas de diagnóstico precoz de errores innatos del metabolismo desde sus orígenes hasta la actualidad, han contribuido considerablemente en la prevención y tratamiento de los mismos. El déficit de Biotinidasa es una enfermedad de herencia autosómica recesiva donde los pacientes afectados pueden presentar crisis convulsivas, hipotonía, ataxia, alopecia y problemas neurológicos. En el año 2005, se da inicio al pesquisaje neonatal para la Deficiencia de Biotinidasa empleando la tecnología SUMA, realizándose el análisis confirmatorio en el Centro Nacional de Genética Médica. Objetivos: Describir los resultados obtenidos en el diagnóstico confirmatorio de Deficiencia de Biotinidasa en el Centro Nacional de Genética Médica, en el periodo 2006-2013.Materiales y Métodos: El método empleado es el descrito por Wolf y colaboradores en 1983 y se basa en la determinación espectrofotométrica de los niveles de ácidos p-aminobenzoico, liberados producto de la acción hidrolítica de la enzima. En el período evaluado se analizaron 906 muestras de pacientes que fueron positivos en el Programa de Pesquisa Neonatal para Biotinidasa. Resultados y Discusión: Se confirmaron 10 casos positivos (1,10%) y los mismos se encuentran distribuidos entre las provincias de Artemisa, La Habana, Matanzas, Cienfuegos, Villa Clara, Holguín, Santiago de Cuba y Guantánamo. Conclusiones: El análisis confirmatorio constituyó una herramienta clave para el diagnóstico de esta enfermedad, reportándose 10 pacientes con Deficiencia de Biotinidasa. Permitió la implementación oportuna de un tratamiento, el asesoramiento genético a los padres para próximos embarazos y un diagnóstico de certeza a los casos con sospecha de riesgo genético.