Introducción: La Hemocromatosis tipo 1 es una enfermedad genética, autosómica recesiva, que se caracteriza por sobrecarga férrica en diferentes órganos provocando el deterioro estructural y funcional de los mismos. Esta patología se origina por la presencia de mutaciones en el gen HFE que se localiza en el brazo corto del cromosoma 6, en el locus 6p21.3. Las mutaciones más frecuentes son H63D y C282Y. Recientemente se ha identificado una nueva mutación que se ha relacionado con sobrecargas ligeras de hierro denominada S65C. Por representar la hemocromatosis tipo 1 un problema de salud a nivel mundial, principalmente en los países con ascendencia europea como Cuba, nos propusimos aumentar las posibilidades de diagnóstico molecular de esta enfermedad con la detección de dicha mutación. Objetivo: Estandarizar en el laboratorio el diagnóstico molecular de la mutación S65C y determinar la frecuencia de esta mutación en pacientes con Hemocromatosis tipo 1. Materiales y Métodos: Para la detección de la mutación se realizó la técnica de reacción en cadena de la polimerasa con los cebadores específicos y posterior digestión enzimática. Resultados: De los 50 pacientes analizados, dos de ellos resultaron heterocigóticos para la mutación S65C, estando presente en el 2% de los cromosomas analizados. Conclusiones: La mutación S65C se encuentra presente en pacientes cubanos con Hemocromatosis Tipo I lo que nos permite ampliar las posibilidades de diagnóstico molecular de la enfermedad en Cuba.