Introducción: Más del 50% de los casos de sordera tienen un origen genético, el 80% de los cuales son no sindrómicas y autosómicas recesivas. Las mutaciones en genes nucleares como el de la conexina 26, están asociadas a la sordera no sindrómica en pacientes con diversos grados de pérdida auditiva. La identificación de estas mutaciones brinda la posibilidad de realizar un diagnóstico temprano de la enfermedad. Objetivo: Estandarizar las técnicas para la detección de las mutaciones 167delT, 235delC y W77X para el diagnóstico molecular de sorderas no sindrómicas. Método: Se trabajó con el   ADN de muestras de sangre periférica de pacientes sordos, negativos o heterocigóticos para 35delG. Se probaron diferentes condiciones de PCR para las mutaciones 167delT y 235delC. En el caso de W77X se utilizaron las condiciones descritas por Baris y Koksal (2003), modificada la concentración de MgCl₂. Para la digestión de los productos amplificados se utilizaron las enzimas de restricción Apa I para 235delC y W77X, y Pst I para 167delT. La electroforesis se realizó en geles de agarosa teñidos con bromuro de etidio. Resultados: La condición óptima de PCR para 167delT y 235delC fue la siguiente: cebadores 0.2 pmol/mL, MgCl₂ 1.5mM, dNTPs 0.06mM, Taq Polimerasa (Invitrogen) 1.5U, para un volumen final de 25 mL. El programa de PCR diseñado incluyó un touchdown, cuyas condiciones fueron optimizadas. La mutación W77X se determinó satisfactoriamente con el procedimiento empleado. Conclusiones: Las condiciones para la amplificación, digestión enzimática y electroforesis de las tres mutaciones de interés fueron estandarizadas exitosamente.