Introducción: La Galactosemia Clásica es el desorden autosómico recesivo del metabolismo de la galactosa de mayor prevalencia a nivel mundial. Se produce por mutaciones en el gen GALT que afectan la actividad de la enzima galactosa-1-fosfato uridiltransferasa. Las diferentes mutaciones de este gen producen distintos fenotipos que pueden variar las recomendaciones terapéuticas. Objetivo: Genotipar cinco mutaciones del gen GALT en pacientes cubanos diagnosticados con Galactosemia Clásica. Métodos: El ADN genómico de 16 pacientes no emparentados fue aislado a partir de sangre periférica mediante métodos estándares. Se empleó la técnica de PCR – RFLP para detectar las mutaciones Q188R, L195P, S135L, K285N y N314D. Resultados: En los 32 alelos analizados se encontraron las mutaciones Q188R (3 alelos), N314D (2 alelos) y L195P (1 alelo) en estado heterocigótico simple en 4 individuos y compuesto en 1. Mientras que las mutaciones S135L y K285N no estaban presentes en la muestra estudiada. Conclusiones: Se estableció el genotipo de los pacientes para las mutaciones Q188R, L195P, S135L, K285N y N314D, lo que constituye el primer acercamiento a las variantes alélicas presentes en la población cubana que permitirá establecer una metodología para el diagnóstico molecular.