Introducción: La enfermedad de Gaucher es el trastorno relacionado con el almacenamiento lisosomal de mayor prevalencia a nivel mundial. Presenta un patrón de herencia autosómico recesivo y se origina principalmente por mutaciones en el gen GBA que afectan la actividad de la enzima ácido- glucocerebrosidasa. Las correlaciones genotipo-fenotipo establecidas permiten pronosticar la evolución de la enfermedad y proporcionar un tratamiento adecuado a los pacientes desde edades tempranas. Objetivo: Caracterizar molecularmente el gen GBA en pacientes cubanos con la enfermedad de Gaucher y sus familiares. Métodos: El ADN genómico de 21 individuos (de ellos 8 casos índice) fue aislado a partir de sangre periférica mediante métodos estándares. Se empleó la técnica de PCR-RFLP para detectar las mutaciones N370S, L444P y G377S; para la variante 55del se utilizó la técnica de PCR. Cuando ninguna de las mutaciones estudiadas por análisis directo estuvo presente, la muestra se sometió a cribado de mutaciones y posterior secuenciación de ADN. Resultados: En los 42 alelos analizados se encontraron las mutaciones N370S (15 alelos) y L444P (8 alelos) en estado homocigótico y heterocigótico compuesto. También se identificaron dos nuevas variantes alélicas. Conclusiones: La caracterización molecular de los pacientes cubanos con la enfermedad de Gaucher resultó efectiva para la confirmación adicional del diagnóstico de la enfermedad en siete de los ocho pacientes analizados y permitió identificar a los familiares portadores de mutaciones. La alta prevalencia de las mutaciones L444P y N370S facilita el diagnóstico molecular de los pacientes y sus familiares.